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指尖“質(zhì)譜”:納米孔技術(shù)打造便攜肽段質(zhì)譜儀
來(lái)源:生物通 | 作者:分析測(cè)試百科網(wǎng) | 發(fā)布時(shí)間: 2019-02-25 | 2068 次瀏覽 | 分享到:
質(zhì)譜儀對(duì)蛋白質(zhì)研究來(lái)說(shuō)可謂是無(wú)價(jià)之寶,但是它們通常體積龐大,價(jià)格昂貴,局限于專門的實(shí)驗(yàn)室。當(dāng)下,生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的下一個(gè)革命直指蛋白質(zhì)組學(xué)——對(duì)不同細(xì)胞類型中表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行大規(guī)模分析。盡管你的身體里每一個(gè)細(xì)胞似乎都攜帶相同的DNA,但不同細(xì)胞類型的蛋白質(zhì)表達(dá)差異很大。此外,蛋白質(zhì)生產(chǎn)出來(lái)后會(huì)被修飾,添加其他東西影響其功能發(fā)揮。
        質(zhì)譜儀對(duì)蛋白質(zhì)研究來(lái)說(shuō)可謂是無(wú)價(jià)之寶,但是它們通常體積龐大,價(jià)格昂貴,局限于專門的實(shí)驗(yàn)室。當(dāng)下,生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的下一個(gè)革命直指蛋白質(zhì)組學(xué)——對(duì)不同細(xì)胞類型中表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行大規(guī)模分析。盡管你的身體里每一個(gè)細(xì)胞似乎都攜帶相同的DNA,但不同細(xì)胞類型的蛋白質(zhì)表達(dá)差異很大。此外,蛋白質(zhì)生產(chǎn)出來(lái)后會(huì)被修飾,添加其他東西影響其功能發(fā)揮。

  質(zhì)量  

  納米孔技術(shù)是一種可以提供分析單個(gè)分子的方法。之前的研究,荷蘭格羅寧根大學(xué)化學(xué)生物學(xué)副教授Giovanni Maglia實(shí)驗(yàn)室表明生物納米孔可以用來(lái)測(cè)量代謝物和識(shí)別蛋白質(zhì)和肽。這些孔是結(jié)合在一個(gè)膜內(nèi)的大蛋白結(jié)構(gòu),分子進(jìn)入或通過小孔時(shí),會(huì)引起穿過小孔的電流發(fā)生變化。Maglia解釋說(shuō),測(cè)量肽質(zhì)量的主要障礙是它們通過*小生物孔的速度太快,以至于無(wú)法讀取。

  制造更小的孔是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。“孔是由許多單體組成的,因此我們*初修改了這些單體之間的相互作用,但這沒起作用。將單體與構(gòu)成膜的大量脂類混合,反而形成的小孔比例更高,這讓Maglia團(tuán)隊(duì)有了修改膜之間相互作用的思路。”


  有史以來(lái)*小的孔  

  然后,Maglia團(tuán)隊(duì)制造出了漏斗狀的孔,在其狹窄的一端只有0.84納米,這是有史以來(lái)*小的生物孔。“下一個(gè)挑戰(zhàn)是確保肽能通過孔,無(wú)論其化學(xué)成分如何,”Maglia解釋說(shuō)。“這些孔帶有負(fù)電荷,這是它們正常工作所必需的。”


  分辨率  

  不同尺寸的納米孔的測(cè)量表明電流與肽通過的體積成線性關(guān)系。這些肽段的長(zhǎng)度從4到22個(gè)氨基酸不等。氨基酸丙氨酸和谷氨酸之間的差異可以在這個(gè)系統(tǒng)中檢出,這意味著納米孔質(zhì)譜儀的分辨率大約是40道爾頓。“傳統(tǒng)質(zhì)譜儀的分辨率要好得多,但是我們能把它的分辨率提高到這種程度,它就已經(jīng)能在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中起作用了,”Maglia說(shuō)。“我們還有很多方法能繼續(xù)改進(jìn),比如用人工氨基酸設(shè)計(jì)納米孔,在溶液中使用不同離子,改變溫度等方法來(lái)降低噪音干擾。”

  納米孔系統(tǒng)有幾個(gè)獨(dú)特的賣點(diǎn):測(cè)量單分子,商業(yè)已經(jīng)開始推廣,而且價(jià)格相對(duì)便宜;便攜,好處不言而喻;可拓展,允許設(shè)備使用不同的孔,您可以同時(shí)測(cè)量不同大小的肽甚至肽修飾。所有的一切都說(shuō)明,多用途、便攜、廉價(jià)的多肽質(zhì)譜儀是可行的,越來(lái)越多實(shí)驗(yàn)室能夠負(fù)擔(dān)得起進(jìn)行非常重要的蛋白質(zhì)組學(xué)研究的經(jīng)費(fèi)。

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